欧美精品在线观看_一边吃奶一边添P好爽故事_国产乱码精品一区二区三区香蕉 _精品少妇人妻AV无码专区偷人

您好!歡迎訪問匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司網(wǎng)站!
全國服務(wù)咨詢熱線:

400-127-6686

當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > Ficoll密度梯度離心法分離PBMC

Ficoll密度梯度離心法分離PBMC

更新時間:2022-06-28      點(diǎn)擊次數(shù):2187

外周血單個核細(xì)胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有單個核的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)、單核細(xì)胞(Monocyte)、樹突狀細(xì)胞(DC)和其他少量細(xì)胞。

1     原理

單個核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與外周血其它細(xì)胞不同,紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞的比重超過1.080,單個核細(xì)胞的比重為1.070左右,血小板為1.030左右。因此,可利用各種血細(xì)胞和單個核細(xì)胞比重之間的差異將各種血細(xì)胞與單個核細(xì)胞分離開來。

Ficoll密度梯度離心法是分離、純化PBMC的方法。Ficoll是蔗糖的多聚體,中性,平均分子量400000,當(dāng)密度為1.2g/mL,未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜,故常用作PBMC分離的分離液。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大,離心后沉于管底;淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分離液比重,離心后漂浮于分離液的液面上,也可有少部分細(xì)胞懸浮在分離液中。吸取分層液液面上的白膜層細(xì)胞,并進(jìn)行適當(dāng)?shù)那逑矗涂蓮耐庵苎蟹蛛x到較高純度的單個核細(xì)胞,即PBMC。

2     方法

1) 取新鮮抗凝全血,按照1:1比例加入1×稀釋洗滌液,將血液進(jìn)行稀釋(以降低血液粘稠度),輕柔混勻,備用。

2) 向無菌離心管內(nèi)加入適量的單個核細(xì)胞分離液,將稀釋后的血樣平鋪到分離液液面上方(分離液:稀釋全血=1:2),保持兩液面界面清晰。 

3) 800g,室溫,離心 20min-30min(注:設(shè)置較慢的加速度和減速度,如果有十檔,設(shè)為第三檔)。 

4) 離心結(jié)束后,吸棄血漿層,小心吸取PBMC層(即白膜層)并轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。離心結(jié)束后,管內(nèi)液面從上至下依次為稀釋血漿層、PBMC層、分離液層和紅細(xì)胞層(見圖1)。 

圖1 稀釋外周血離心前后的分層狀態(tài)圖

5) 向離心管中加入10mL 的1×稀釋洗滌液重懸細(xì)胞,250g,室溫離心 10min ,棄上清。重復(fù)該步驟 1~2 次,即可用于后續(xù)試驗。

3     注意事項

1) 不同種屬動物單個核細(xì)胞的比重有一定差異,請選擇合適的分離液進(jìn)行PBMC的分離。

2) 血液新鮮程度是影響分離效果的關(guān)鍵因素,請盡量使用采集后24h內(nèi)的血液進(jìn)行PBMC分離。

3) 為保證細(xì)胞的活力,整個操作過程請輕柔,避免對細(xì)胞造成機(jī)械性的損傷。

4) 為保持細(xì)胞狀態(tài)良好,請盡量縮短整個試驗的周期。

4     相關(guān)產(chǎn)品

關(guān)    于    我    們


匯智和源,致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供高品質(zhì)的生物試劑,IPHASE為公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research"。

匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司
地址:北京市北京經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)科創(chuàng)十四街99號十八號樓1832室
郵箱:support@iphasebio.com
傳真:
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號
了解更多信息